La serie está ambientada en la ciudad ficticia de San Canario (St. Canard en la versión Inglesa. Una versión de San Francisco adaptada por Disney), asolada por los crímenes, siendo entonces cuando Drake Mallard, un Patoantropomorfo decide combatir el crimen y proteger la ciudad sin que se desvele su identidad. En su lucha por el bien contará con la ayuda de Joe McQuack (procedente de la serie Patoaventuras), además de la lucha contra el mal debe estar al cuidado de su hija adoptiva Goszalyn, huérfana cuando su abuelo falleció, evitando que interfiera en su misión, aunque no con mucho éxito. Uno de los escenarios donde se desarrollan los eventos, es en un puente, similar al Golden Gate, donde Darkwing tiene su guarida en una de las torres del puente.
Personajes principales
Darkwing/Drake Mallard: Es ciudadano de a pie en San Canario hasta que cae el día y empieza la noche, cuando sale a defender la ciudad de los villanos, cuando va a combatir viste capa y antifaz color violeta.
Gosalyn Mallard: Hija adoptiva del Pato Darkwing desde que se quedó huérfana, es muy revoltosa y le gusta meterse en lios, incluso pretende simular las proezas de Darkwing. Ella es la única junto a McQuack que conocen la identidad de Darkwing.
Joe McQuack: Procedente de Patoaventuras, ayuda a Darkwing en su lucha contra el crimen, conoció a Darkwing cuando este cayo sobre el tejado de su taller, al igual que en la serie de la que precede es un piloto bastante torpe que intentara hacerse amigo de él, el cual es su ídolo.
NegaPato: Es el mayor archinémesis de Darkwing a la vez que su gemelo, los dos son el lado opuesto de donde vienen.
Megavolt: Es una rata con la innata capacidad de absorber la energía eléctrica, usa la electricidad como su energía vital y a la vez para crear armas.
Dr. Reginald Bushroot: Anteriormente era un pato, pero debido a que decidió experimentar consigo mismo para vivir igual que las plantas se convirtió en "mitad pato" mitad planta".
Quackerjack: Un bufón bastante compulsivo que tiene una extraña obsesión con los juguetes, utiliza los mismos como arma. Este estilo de pelea, lo hace comparable con el villano "El Joker" de Batman.
El Liquidador: Un ser de agua viva que tiene la abilidad de controlar cualquier líquido a su gusto.
Taurus Bulba: Es uno de los muchos villanos que tiene, fue llevado a la cárcel tiene que dirigir su imperio del crimen a través de ella mediante tres secuaces. Quiso secuestrar a Goszalyn debido a que ella conoce un código secreto que su abuelo le cantaba.
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